Повествование романа разворачивается вокруг Жюстины - юной девушки из благородной семьи, которая вдруг стала сиротой, стремится зарабатывать себе на жизнь честно и следовать строгим моральным нормам католичества.

Все усилия девушки оказываются напрасными: похищение, изнасилования и ложные обвинения являются лишь началом жестоких испытаний.

В финале Жюстине противопоставляется ей сестра Жюльетта, которая, в отличие от Жюстины, предавалась порокам и извращениям, и которой выпала более удачная доля.